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    新闻资讯

    哺乳动物细胞蛋白表达服务公司

    2015-11-30
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    访问量:

    哺乳动物细胞蛋白表达系统

    哺乳动物细胞蛋白表达系统具备完善的蛋白折叠与翻译后修饰(PTMs)能力,能够促进蛋白质正确折叠,并完成复杂的N型糖基化、O型糖基化、磷酸化等多种翻译后修饰,从而使表达产物在分子结构、理化特性及生物学功能等方面更接近天然蛋白。因此,哺乳动物细胞表达系统已成为治疗性重组蛋白,尤其是单克隆抗体药物研发与生产中应用最广泛的表达平台

    金年会诚信至上生物医药基于无血清培养体系,搭建了成熟的哺乳动物蛋白表达与纯化服务平台, 给予哺乳动物细胞表达载体构建与制备、CHO和HEK293细胞瞬时表达筛选、CHO-S和CHO-DG44稳定细胞系构建、CHO悬浮细胞生物反应器培养(3-30L),以及杂交瘤细胞滚瓶培养或生物反应器培养等服务。

    服务项目:

    贴壁细胞及悬浮细胞培养

    瞬时转染表达筛选

    稳定细胞系构建

    Rabbit IgG expressed in transient transfected 293 cells

    哺乳动物细胞表达系统

    Note: the condition medium was run in 10%SDS-PAGE gel and stained with coomassie blue(备注:)

    哺乳动物细胞蛋白表达系统的分类

    根据目的蛋白表达的时空差异,可将表达系统分为以下三类:

    表达系统特点优势局限性
    瞬时表达系统宿主细胞导入载体后不经选择培养,载体DNA随细胞分裂逐渐丢失,目的蛋白的表达时限短暂操作简洁、实验周期短;已有报道能放大到100L反应器中生产重组蛋白,产量(分泌型蛋白)可达1~10mg/L对质粒纯度、转染效率等技术条件要求较高
    稳定表达系统载体进入宿主细胞并经选择培养,载体DNA稳定存在于细胞内,目的蛋白持久稳定表达表达持久稳定,适合长期、大批量生产需抗性筛选及加压扩增,耗时耗力
    诱导表达系统目的基因转录受外源小分子诱导后才开放可精准调控表达时机,降低本底表达毒性传统诱导剂(糖皮质激素、重金属离子等)存在特异性低、毒性高等问题

    如何选择适合的表达系统?

    重组蛋白的表达水平受多重因素影响,包括:转录与翻译调控元件、RNA剪接效率、mRNA稳定性、 基因在染色体上的整合位点、重组蛋白对宿主细胞的毒性以及宿主细胞的遗传背景等。

    核心建议:选定表达系统后,还需考虑表达载体与宿主细胞的合理搭配。 为取得目标基因的高水平表达,建议同时尝试多种载体与宿主细胞组合,顺利获得并行筛选找到最优方案。

    应用领域与实验流程

    哺乳动物细胞表达系统已成为多种基因工程药物的核心生产平台,并在新基因发现、蛋白质结构与功能研究中发挥着不可替代的作用。

    稳定表达细胞系的筛选流程

    构建目的基因的表达载体
    确定合适的受体细胞系
    确定筛选方法(抗生素使用浓度优化)
    转染后48小时,梯度稀释铺板(1:100),加入筛选药物
    每3~4天换液一次,约2周后存活细胞长出岛状细胞克隆
    挑取单克隆耐药细胞,检测目的基因的存在与表达水平

    哺乳动物细胞表达系统的关键要素

    宿主细胞选择 —— CHO、HEK293、BHK、Vero 等

    表达载体构建 —— 启动子、增强子、筛选标记等元件优化

    基因共扩增与筛选 —— DHFR/GS 等扩增系统

    可调控表达系统 —— Tet-On/Tet-Off 等诱导调控体系

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